Barisan pelakon utama dan peranan masing-masing adalah seperti yang berikut:

• Seth MacFarlane yang menyuarakan Peter Griffin, Stewie Griffin, Brian Griffin, Glenn Quagmire, dan Tom Tucker;
• Alex Borstein sebagai Lois Griffin, Loretta Brown (sehingga watak itu ditamatkan pada musim keempat), dan Trisha Takanawa;
• Seth Green sebagai Chris Griffin; dan
• Mila Kunis sebagai Meg Griffin.

Selain daripada watak yang tersenarai di atas, para pelakon utama juga menyuarakan untuk sebilangan watak berulangan serta menyamar orang yang termasyhur dan ikon budaya pop.

Barisan pelakon yang berulangan termasuk:

• Patrick Warburton sebagai Joe Swanson;
• Mike Henry sebagai Cleveland Brown;
• Adam West sebagai datur bandar Adam West;
• Jennifer Tilly sebagai Bonnie Swanson;
• John G. Brennan sebagai Mort Goldman;
• Nicole Sullivan sebagai Muriel Goldman;
• Carlos Alazraqui sebagai Jonathan Weed (sehingga watak itu ditamatkan pada musim ketiga);
• Adam Carolla sebagai Death (tidak termasuk kemunculan pertama ketika watak itu disuarakan oleh Norm MacDonald); dan
• Lori Alan sebagai Diane Simmons.

Lacey Chabert menyuarakan Meg Griffin untuk musim pertama (15 episod). Walaupun demikian, beliau tidak diberikan sebarang penghargaan kerana persetujuan berkontraknya.[5] Bagaimanapun, beliau akhirnya dihargai pada akhir Rancangan Istimewa Episod Ke-100 Family Guy yang menonjolkan petikan karyanya.